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04.03.2019 | Original Article | Ausgabe 5/2019

International Journal of Hematology 5/2019

A novel method of amplified fluorescent in situ hybridization for detection of chromosomal microdeletions in B cell lymphoma

Zeitschrift:
International Journal of Hematology > Ausgabe 5/2019
Autoren:
Yoshimi Mizuno, Yoshiaki Chinen, Taku Tsukamoto, Tomoko Takimoto-Shimomura, Yayoi Matsumura-Kimoto, Yuto Fujibayashi, Saeko Kuwahara-Ota, Takahiro Fujino, Daichi Nishiyama, Yuji Shimura, Tsutomu Kobayashi, Shigeo Horiike, Masafumi Taniwaki, Junya Kuroda
Wichtige Hinweise

Electronic supplementary material

The online version of this article (https://​doi.​org/​10.​1007/​s12185-019-02617-x) contains supplementary material, which is available to authorized users.

Publisher’s Note

Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional affiliations.

Abstract

Chromosomal microdeletions frequently cause loss of prognostically relevant tumor suppressor genes in hematologic malignancies; however, detection of minute deletions by conventional methods for chromosomal analysis, such as G-banding and fluorescence in situ hybridization (FISH), is difficult due to their low resolution. Here, we describe a new diagnostic modality that enables detection of chromosomal microdeletions, using CDKN2A gene deletion in B cell lymphomas (BCLs) as an example. In this method, which we refer to as amplified-FISH (AM-FISH), a 31-kb fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated DNA probe encoding only CDKN2A was first hybridized with the chromosome, and then labeled with Alexa Fluor 488-conjugated anti-FITC secondary antibody to increase sensitivity. CDKN2A signals were equally identifiable by AM-FISH and conventional FISH in normal mononuclear blood cells. In contrast, when two BCL cell lines lacking CDKN2A were analyzed, CDKN2A signals were not detected by AM-FISH, whereas conventional FISH yielded false signals. Furthermore, AM-FISH detected CDKN2A deletions in two BCL patients with 9p21 microdeletions, which were not detected by conventional FISH. These results suggest that AM-FISH is a highly sensitive, specific, and simple method for diagnosis of chromosomal microdeletions.

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