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01.02.2013 | Original Article | Ausgabe 2/2013

Archives of Virology 2/2013

A SYBR Green-based real-time RT-PCR assay for simple and rapid detection and differentiation of highly pathogenic and classical type 2 porcine reproductive and respiratory syndrome virus circulating in China

Zeitschrift:
Archives of Virology > Ausgabe 2/2013
Autoren:
Zheng Chai, Wenjun Ma, Fang Fu, Yuekun Lang, Wei Wang, Guangzhi Tong, Qinfang Liu, Xuehui Cai, Xi Li

Abstract

SYBR Green coupled to melting curve analysis has been suggested to detect RNA viruses showing high genomic variability. Here, a SYBR Green-based real-time RT-PCR assay was developed for simultaneous detection and differentiation of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) and classical type 2 PRRSV (C-PRRSV). The different strains were identified by their distinctive melting temperatures: 82.98 ± 0.25 °C and 85.95 ± 0.24 °C for HP-PRRSVs or 82.74 ± 0.26 °C for C-PRRSVs. Specificity was tested using nine other viral and bacterial pathogens of swine. The detection limit was 1 TCID50 for HP- or C-PRRSV. Furthermore, the detection results for samples from an animal trial with HP- or C-PRRSV infections showed that the SYBR Green-based real-time RT-PCR was more sensitive than the conventional RT-PCR. Additionally, an analysis of 319 field samples from North China, Central China and Northeast China showed that HP- and C-PRRSVs co-circulated in pig herds. Thus, the SYBR Green-based real-time RT-PCR, which can be performed within one hour, is a rapid, sensitive and low-cost diagnostic tool for rapid differential detection and routine surveillance of HP- and classical type 2 PRRSVs in China.

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