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13.02.2019 | Original Article | Ausgabe 5/2019

Cancer Chemotherapy and Pharmacology 5/2019

Determination of melphalan in human plasma by UPLC–UV method

Cancer Chemotherapy and Pharmacology > Ausgabe 5/2019
Liusheng Huang, Vincent Cheah, Danna Chan, Florence Marzan, Christopher C. Dvorak, Francesca T. Aweeka, Janel Long-Boyle
Wichtige Hinweise

Electronic supplementary material

The online version of this article (https://​doi.​org/​10.​1007/​s00280-019-03786-6) contains supplementary material, which is available to authorized users.

Publisher's Note

Springer Nature remains neutral with regard to jurisdictional claims in published maps and institutional affiliations.


It is desirable to develop a fast method for quantification of melphalan due to its instability. Here we report a method for quantification of melphalan (MPL) in human plasma using a UPLC–PDA system. Briefly, 50 µL plasma sample was mixed with 25 µL internal standard (2500 ng/mL acetylmelphalan in methanol) and 25 µL 20% trichloroacetic acid, and centrifuged at 21,000 g (15,000 rpm) at 4 °C for 3 min. The supernatant (5 µL) was injected onto an Acquity™ BEH C18 LC column (2.1 × 50 mm, 1.7 µm) and eluted with 25 mM NH4AC (pH 4.7)—acetonitrile in a gradient mode at a flow rate of 0.6 mL/min. The column kept at 40 ± 5 °C and the autosampler kept at 4 ± 5 °C. The detector set at 261 nm, and sampling rate was 40points/sec. The retention times were typically 2.11 min for melphalan and 2.38 min for the internal standard. Total run time is 4 min per sample. Calibration range was 100–40,000 ng/mL. The lower limit of quantification was 100 ng/mL. The method was validated based on the FDA guidelines, and applied to a clinical pharmacokinetic study in pediatric patients.

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