Northern blot

RNA blot

northern blotting

Der Northern blot ist eine Methode zur elektrophoretischen Auftrennung von RNA mit nachfolgender elektrophoretischer Übertragung des kompletten Trennmusters auf eine Trägerfolie, auf der es fixiert und identifiziert wird.

In einem ersten Schritt erfolgt die agargelelektrophoretische Trennung des RNA-Gemisches nach ihrer Molekülgröße unter vollständig denaturierenden Bedingungen. Dazu kann die Auftrennung in Glyoxal-, Formaldehyd-, Harnstoffgelen oder unter alkalischen Bedingungen erfolgen. Im zweiten Schritt erfolgt der Transfer der aufgetrennten RNA-Fragmente auf eine Nylon- oder Nitrocellulosemembran, auf der sie im dritten Schritt durch Hitzeeinwirkung oder UV-Bestrahlung fixiert und danach identifiziert werden. Mit markierten Gensonden, das sind radioaktiv- oder fluoreszenzmarkierte, einzelsträngige DNA-, RNA-Moleküle oder synthetische Oligonukleotide mit einer zur Ziel-RNA komplementären, hybridisierenden Basensequenz, können die RNA-Fragmente identifiziert werden. Mitgeführte RNA-Molekulargewichtsmarker erlauben die Größenbestimmung der aufgetrennten Fragmente.

Die Methode dient primär dem qualitative und quantitativen Nachweis spezifischer Genexpressionen und somit der Transkriptionsstärke eines Gens.

Isolierte RNA, mRNA aus allen humanen und tierischen Geweben und Zellen.

Agargelelektrophorese (Elektrophorese), Blotting-Apparatur, Autoradiographie.

Hoch bei optimaler Durchführung.

Bei inkorrekter Durchführung grundsätzlich in allen Teilschritten gegeben.

Es handelt sich im Allgemeinen um ein molekularbiologisches Standardverfahren, das nicht automatisiert ist.

Es handelt sich um eine Methode mit breitem Anwendungsbereich in Forschung und erweiterter, differenzierter Labordiagnostik.