Lexikon der Medizinischen Laboratoriumsdiagnostik
Autoren
J. Arnemann

PCR, quantitative in Echtzeit

PCR, quantitative in Echtzeit
Synonym(e)
Echtzeit-PCR, quantitative; qPCR; Realtime-PCR
Englischer Begriff
quantitative realtime PCR
Definition
Die quantitative Echtzeit-PCR (qPCR) ist eine Modifikation der klassischen PCR (Polymerase-Kettenreaktion), die durch Einsatz von fluoreszenzmarkierten Sonden eine Quantifizierung des PCR-Produkts ermöglicht.
Beschreibung
Eine Quantifizierung der PCR-Produkte wird meist im Zusammenhang mit Expressionsanalysen durchgeführt. So werden im Vorfeld der qPCR meist die RNAs in cDNAs umgeschrieben, um dann aus dem Pool an cDNAs bzw. gewebsspezifischen Transkripten die gewünschte Zielsequenz zu amplifizieren. Für eine Quantifizierung werden definierte Standards (z. B. Plasmide) oder auch interne Referenzgene (z. B. „housekeeping genes“) eingesetzt. Für die eigentliche Quantifizierung werden fluoreszenzmarkierte Sonden verwendet, die an die PCR-Produkte binden und während eines PCR-Zyklus in Echtzeit detektiert werden. Die Fluoreszenzdaten aus der exponentiellen Phase der qPCR, wenn die Reaktionsbedingungen optimal sind, werden zur Quantifizierung herangezogen und zusammen mit denen der eingesetzten Referenzprobe ausgewertet.
Literatur
Hughes S, Moody A (Hrsg) (2007) PCR. Scion Publishing Ltd, Bloxham
Schmittgen TD, Livak KJ (2008) Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nat Protoc 3:1101–1108CrossRefPubMed