Isolation and curing of the Klebsiella pneumoniae large indigenous plasmid using sodium dodecyl sulphate

https://doi.org/10.1016/S0923-2508(00)00140-6Get rights and content
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Abstract

The ability of Klebsiella pneumoniae (NCTC, CL687/80) to produce and, in turn, excrete glutamate has been equated with the presence of a large indigenous plasmid with an apparent molecular mass in the region of 96 ± 2 kbp (n = 6). Unlike mitomycin C, novobiocine and ethidium bromide (curing agents), the use of sodium dodecyl sulphate (SDS) proved very effective in curing the plasmid with a relatively high frequency (6.25 × 10–4). Furthermore, the absence of isocitrate dehydrogenase (ICDH) activity in the cured strain strongly suggests that the structural gene encoding ICDH in this organism, in sharp contrast to all known ICDHs, is plasmid-encoded. Moreover, the SDS-based protocol reported for the isolation of the K. pneumoniae indigenous plasmid has proven successful with other organisms including Pseudomonad and Corynebacteria, as well as in recombinant strains of Escherichia coli.

Résumé

Isolement et élimination d'un plasmide endogène de Klebsiella pneumoniae par l'utilisation de dodécylsulfate de sodium. La capacité de Klebsiella pneumoniae (NCTC, CL 687/80) de produire et, ensuite, d'excréter le glutamate a été reliée à la présence d'un plasmide endogène de grande taille. À la différence de la mitomycine C, de la novobiocine et du bromure d'éthidium (agents d'élimination), l'utilisation de dodécylsulfate de sodium (SDS) s'est avérée très efficace pour éliminer le plasmide à une fréquence relativement élevée. De plus, l'absence d'activité isocitrate déshydrogénase (ICDH) dans la souche dépourvue de plasmide suggère fortement que le gène de structure codant l'ICDH dans cet organisme est localisé sur le plasmide, à la différence de tous les autres gènes d'ICDH caractérisés à ce jour. Par ailleurs, le protocole expérimental basé sur l'utilisation de SDS tel qu'il est décrit pour l'isolement du plasmide endogène de K. pneumoniae s'est avéré également applicable à d'autres organismes notamment Pseudomonas, les Corynébactéries et certaines souches recombinantes d'E. coli.

Keywords

Klebsiella pneumoniae
plasmid, indigenous
curing
SDS
glutamate excretion

Mots-clé

Klebsiella pneumoniae
plasmides endogènes
elimination de plasmides de grande taille
SDS
excrétion du glutamate

Abbreviations

ICDH, isocitrate dehydrogenase
SDS, sodium dodecyl sulphate
KPNS, potassium, phosphate, nitrogen source solution
NADP, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
OD, optical density

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