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Erschienen in: Der Ophthalmologe 4/2010

01.04.2010 | Originalien

Vergleichende In-vitro-Analyse von primären und immortalisierten Keratozyten

verfasst von: L. Kagan, P.W. Rieck

Erschienen in: Die Ophthalmologie | Ausgabe 4/2010

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Zusammenfassung

Hintergrund

Die Kultivierung von primären Keratozyten (HCKp) ist schwierig und wird multifaktoriell beeinflusst. Untersucht wurde, ob immortalisierte Keratozyten (HCKi) diese in Versuchen ersetzen und beim Aufbau eines Kornea-Äquivalents nützlich sein können.

Material und Methoden

HCKp und HCKi wurden kultiviert und mit Benzalkoniumchlorid (BAC) oder Cetrimid für 72 h in den Konzentrationen 40–0,1 μg/ml bzw. 100–0,01 μg/ml behandelt. Es wurden die Vitalität und die Verdopplungszeit (tv) bestimmt.

Ergebnisse

40 bzw. 4 μg/ml BAC sowie 100 bzw. 10 μg/ml führten zu einem Absterben der Zellen. Die tv war insgesamt bei den HCKi verkürzt, insbesondere jedoch bei mit BAC behandelten Zellen, wobei nur die HCKp hierbei einen signifikanten Vitalitätsverlust zeigten. Bei den mit Cetrimid behandelten Zellen stieg die tv in beiden Zellreihen signifikant an, wobei in beiden Zellreihen ab 0,1 μg/ml kein Vitalitätsverlust mehr nachweisbar war.

Schlussfolgerung

Insgesamt sind HCKi widerstandsfähiger und proliferativer als HCKp. Sie können jedoch in Vorversuchen als Ersatz für primäre Zellen in Toxizitätsstudien etc. unter Berücksichtigung der vorhandenen Unterschiede beider Zellreihen, wie Proliferationskapazität und Reaktion auf Substanzen, eingesetzt werden.
Literatur
1.
Zurück zum Zitat Araki K, Ohashi Y, Sasabe T et al (1993) Immortalisation of rabbit corneal epithelial cells by a recombinant SV40-adenovirus vector. Invest Ophthalmol Vis Sci 18:2665–2671 Araki K, Ohashi Y, Sasabe T et al (1993) Immortalisation of rabbit corneal epithelial cells by a recombinant SV40-adenovirus vector. Invest Ophthalmol Vis Sci 18:2665–2671
2.
Zurück zum Zitat Araki-Sasaki K, Ohashi Y, Sasabe T et al (1995) An SV40-Immortalized human corneal epithelial cell line and Its characterization. Invest Ophthalmol Vis Sci 36:614–621PubMed Araki-Sasaki K, Ohashi Y, Sasabe T et al (1995) An SV40-Immortalized human corneal epithelial cell line and Its characterization. Invest Ophthalmol Vis Sci 36:614–621PubMed
3.
Zurück zum Zitat Barry-Lane PA, Wilson SE, Cavanagh HD et al (1997) Characterization of SV40-transfected cell strains from rabbit keratocytes. Cornea 16:72–78CrossRefPubMed Barry-Lane PA, Wilson SE, Cavanagh HD et al (1997) Characterization of SV40-transfected cell strains from rabbit keratocytes. Cornea 16:72–78CrossRefPubMed
4.
Zurück zum Zitat Bednarz J, Teigel M, Friedl P, Engelmann K (2000) Immortalization of human corneal endothelial cells using electroporation protocol optimized for human corneal endothelial and human retinal pigment epithelial cells. Acta Ophthalmol Scand 78:130–136CrossRefPubMed Bednarz J, Teigel M, Friedl P, Engelmann K (2000) Immortalization of human corneal endothelial cells using electroporation protocol optimized for human corneal endothelial and human retinal pigment epithelial cells. Acta Ophthalmol Scand 78:130–136CrossRefPubMed
5.
Zurück zum Zitat Brasnu E, Brignole-Baudouin F, Riancho L et al (2008) Comparative study on cytotoxic effects of benzalkonium chloride on the Wong-Kilbourne derivative of Chang conjunctival and IOBA-NHC cell lines. Mol Vis 14:394–402PubMed Brasnu E, Brignole-Baudouin F, Riancho L et al (2008) Comparative study on cytotoxic effects of benzalkonium chloride on the Wong-Kilbourne derivative of Chang conjunctival and IOBA-NHC cell lines. Mol Vis 14:394–402PubMed
6.
Zurück zum Zitat Cha SH, Lee JS, Oum BS, Kim CD (2004) Corneal epithelial cellular dysfunction from benzalkonium chloride (BAC) in vitro. Clin Exp Ophthalmol 32:180–184CrossRef Cha SH, Lee JS, Oum BS, Kim CD (2004) Corneal epithelial cellular dysfunction from benzalkonium chloride (BAC) in vitro. Clin Exp Ophthalmol 32:180–184CrossRef
7.
Zurück zum Zitat Chung SH, Lee SK, Cristol SM et al (2006) Impact of short-term exposure of commercial eyedrops preserved with benzalkonium chloride on precorneal mucin. Mol Vis 12:415–421PubMed Chung SH, Lee SK, Cristol SM et al (2006) Impact of short-term exposure of commercial eyedrops preserved with benzalkonium chloride on precorneal mucin. Mol Vis 12:415–421PubMed
8.
Zurück zum Zitat Debbasch C, Brignole F, Pisella PJ et al (2001) Quaternary ammoniums and other preservatives‘ contribution in oxidative stress and apoptosis on chang conjunctival cells. Invest Ophthalmol Vis Sci 42:642–652PubMed Debbasch C, Brignole F, Pisella PJ et al (2001) Quaternary ammoniums and other preservatives‘ contribution in oxidative stress and apoptosis on chang conjunctival cells. Invest Ophthalmol Vis Sci 42:642–652PubMed
9.
Zurück zum Zitat Feldman S, Gately D, Chien KR, Feramisco JR (1993) Expression of SV40 virus large T antigen by recombinant adenoviruses activates proliferation of corneal endothelium in vitro. J Clin Invest 9:1713–1720CrossRef Feldman S, Gately D, Chien KR, Feramisco JR (1993) Expression of SV40 virus large T antigen by recombinant adenoviruses activates proliferation of corneal endothelium in vitro. J Clin Invest 9:1713–1720CrossRef
10.
Zurück zum Zitat Germain L, Carrier P, Auger FA et al (2000) Can we produce a human corneal equivalent by tissue engineering? Prog Retin Eye Res 19:497–527CrossRefPubMed Germain L, Carrier P, Auger FA et al (2000) Can we produce a human corneal equivalent by tissue engineering? Prog Retin Eye Res 19:497–527CrossRefPubMed
11.
Zurück zum Zitat Göbbels M, Spitznas M (1992) Corneal epithelial permeability of dry eyes before and after treatment with artificial tears. Ophthalmology 99:873–878PubMed Göbbels M, Spitznas M (1992) Corneal epithelial permeability of dry eyes before and after treatment with artificial tears. Ophthalmology 99:873–878PubMed
12.
Zurück zum Zitat Griffith M, Osborne R, Munger R et al (1999) Functional human corneal equivalents constructed from cell lines. Science 286:2169–2172CrossRefPubMed Griffith M, Osborne R, Munger R et al (1999) Functional human corneal equivalents constructed from cell lines. Science 286:2169–2172CrossRefPubMed
13.
Zurück zum Zitat Ivarsen A, Laurberg T, Moller-Pedersen T (2004) Role of keratocyte loss on corneal wound repair after LASIK. Invest Ophthalmol Vis Sci 45:3499–3506CrossRefPubMed Ivarsen A, Laurberg T, Moller-Pedersen T (2004) Role of keratocyte loss on corneal wound repair after LASIK. Invest Ophthalmol Vis Sci 45:3499–3506CrossRefPubMed
14.
Zurück zum Zitat Minami Y, Sugihara H, Oono S (1993) Reconstruction of cornea in three-dimensional collagen gel matrix culture. Invest Ophthalmol Vis Sci 34:2316–2324PubMed Minami Y, Sugihara H, Oono S (1993) Reconstruction of cornea in three-dimensional collagen gel matrix culture. Invest Ophthalmol Vis Sci 34:2316–2324PubMed
15.
Zurück zum Zitat Reichl S, Bednarz J, Müller-Goymann CC (2004) Human corneal equivalent as cell culture model for in vitro drug permeation studies. Br J Ophthalmol 88:560–565CrossRefPubMed Reichl S, Bednarz J, Müller-Goymann CC (2004) Human corneal equivalent as cell culture model for in vitro drug permeation studies. Br J Ophthalmol 88:560–565CrossRefPubMed
16.
Zurück zum Zitat Reichl S, Döhring S, Bednarz J, Müller-Goymann CC (2005) Human cornea construct HCC- an alternative for in vitro permeation studies? A comparison with human donor corneas. Eur J Pharm Biopharm 60:305–308CrossRefPubMed Reichl S, Döhring S, Bednarz J, Müller-Goymann CC (2005) Human cornea construct HCC- an alternative for in vitro permeation studies? A comparison with human donor corneas. Eur J Pharm Biopharm 60:305–308CrossRefPubMed
17.
Zurück zum Zitat Rieck PW, Sherif ZA-R, Hartmann C, Pleyer U (2003) Wundheilung der Hornhaut Teil I: Biologische Grundlagen und ihre klinische Relevanz. Ophthalmologe 100:749–770CrossRef Rieck PW, Sherif ZA-R, Hartmann C, Pleyer U (2003) Wundheilung der Hornhaut Teil I: Biologische Grundlagen und ihre klinische Relevanz. Ophthalmologe 100:749–770CrossRef
18.
Zurück zum Zitat Tripathi BJ, Tripathi RC, Kolli SP (1992) Cytotoxicity of ophthalmic preservatives on human corneal epithelium. Lens Eye Toxic Res 9:361–375PubMed Tripathi BJ, Tripathi RC, Kolli SP (1992) Cytotoxicity of ophthalmic preservatives on human corneal epithelium. Lens Eye Toxic Res 9:361–375PubMed
19.
Zurück zum Zitat Wilson SE, Lloyd SA, He YG, McCash CS (1993) Extended life of human corneal endothelial cells transfected with the SV40 large T antigen. Invest Ophthalmol Vis Sci 34:2112–2123PubMed Wilson SE, Lloyd SA, He YG, McCash CS (1993) Extended life of human corneal endothelial cells transfected with the SV40 large T antigen. Invest Ophthalmol Vis Sci 34:2112–2123PubMed
20.
Zurück zum Zitat Wu KY, Wang HZ, Hong SJ (2006) Effects of antiglaucoma drugs on cellular proliferation in cultured human corneal keratocytes. Kaohsiung J Med Sci 22:120–125CrossRefPubMed Wu KY, Wang HZ, Hong SJ (2006) Effects of antiglaucoma drugs on cellular proliferation in cultured human corneal keratocytes. Kaohsiung J Med Sci 22:120–125CrossRefPubMed
21.
Zurück zum Zitat Zorn-Kruppa M, Tykhonova S, Belge G et al (2004) Comparison of human corneal cell cultures in cytotoxicity testing. Altex 21:129–134PubMed Zorn-Kruppa M, Tykhonova S, Belge G et al (2004) Comparison of human corneal cell cultures in cytotoxicity testing. Altex 21:129–134PubMed
22.
Zurück zum Zitat Zorn-Kruppa M, Tykhonova S, Belge G et al (2005) A human corneal equivalent constructed from SV40-immortalisied corneal cell lines. ATLA 33:37–45PubMed Zorn-Kruppa M, Tykhonova S, Belge G et al (2005) A human corneal equivalent constructed from SV40-immortalisied corneal cell lines. ATLA 33:37–45PubMed
Metadaten
Titel
Vergleichende In-vitro-Analyse von primären und immortalisierten Keratozyten
verfasst von
L. Kagan
P.W. Rieck
Publikationsdatum
01.04.2010
Verlag
Springer-Verlag
Erschienen in
Die Ophthalmologie / Ausgabe 4/2010
Print ISSN: 2731-720X
Elektronische ISSN: 2731-7218
DOI
https://doi.org/10.1007/s00347-009-2003-4

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