Konventionelle und molekulare Diagnostik bei Onychomykose – Teil 2

Die Identifizierung von Dermatophyten mit traditionellen Methoden wie direkter fluoreszenzoptischer Mikroskopie und Kultur wird heutzutage durch molekularbiologische Methoden ergänzt. Die Validität des Dermatophyten-DNA(Desoxyribonukleinsäure)-Nachweises mit einem direkten Uniplex-PCR(Polymerasekettenreaktion)-EIA (Enzymimmunoassay) in Nagelproben wurde durch Sequenzanalyse der ribosomalen ITS(„internal transcribed spacer“)-Region belegt. Es waren 108 Dermatophyten, isoliert von Patienten mit Onychomykose, in Kultur und/oder Uniplex-PCR-EIA positiv für Trichophyton (T.) rubrum (TR) und Trichophyton interdigitale (TI). Herkömmliche Methoden zur Dermatophytenidentifizierung wurden durch eine direkte Uniplex-PCR-EIA und Sequenzanalyse der ribosomalen ITS-Region (18S rRNA [ribosomale Ribonukleinsäure], ITS1, 5.8S rRNA, ITS2, 28S rRNA) ergänzt. Es zeigten 56 von 108 Patienten (Durchschnittsalter 62, Median 73) kulturelles Wachstum, 31 von ihnen wurden als TR und 23 als TI identifiziert. Es gab eine hohe Übereinstimmung mit der Sequenzanalyse. Überraschenderweise wurde der Erreger einer einzelnen Nagelprobe als T. quinckeanum (früher T. mentagrophytes sensu stricto) identifiziert, ein in Deutschland seltener zoophiler Dermatophyt. Ein einzelner TI-Stamm stellte sich aufgrund einer Sequenzanalyse als falsch identifizierter T. tonsurans heraus. Es wurden 34 der 52 Proben ohne Kulturwachstum durch PCR als TR erkannt, und 18 Proben konnten als TI bestimmt werden. Die Ergebnisse der Dermatophytenidentifizierung von kulturnegativen Nagelproben stimmten auch perfekt mit den Ergebnissen der Sequenzanalyse überein. Molekularbiologische Methoden sind gut anwendbar und zeigen eine hohe Zuverlässigkeit für den direkten Dermatophytennachweis in Nagelproben ohne vorherige Kultivierung. Insbesondere für Nagelproben ohne Kulturwachstum hat sich der PCR-basierte Dermatophytennachweis als hochspezifische und sensitive Methode erwiesen.